除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解，不需高壓滅菌外，大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘。尤其是對無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌不徹底，直接關(guān)系到試驗(yàn)結(jié)果。因此必須認(rèn)真對高壓滅菌器進(jìn)行滅菌效果的驗(yàn)證。 

1．試驗(yàn)材料

(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-lO5 CFU/片。

(2)121℃壓力蒸氣滅菌化學(xué)指示卡。

(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓滅菌20分鐘后備用。

(4)O-150℃留點(diǎn)溫度計(jì)。

2．方法與結(jié)果

將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中。化學(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計(jì)放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層，則需放10處。

留點(diǎn)溫度計(jì)標(biāo)化合格后方可用于驗(yàn)證試驗(yàn)。檢測前，需將溫度計(jì)的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測后留點(diǎn)溫度計(jì)的溫差應(yīng)存1℃之間，則說明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的。溫度驗(yàn)證儀

滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時，觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長，分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色，則說明芽胞已滅活。同時要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照，不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照。

化學(xué)指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時，由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺，并與對照色相比，可判斷滅菌效果是否達(dá)到要求?；瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會變色，影響滅菌效果的觀測。

高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進(jìn)入滅菌器內(nèi)，與滅菌物品接觸，并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到滅菌的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗(yàn)證(滿載時不超過總體積的2/3)。二種驗(yàn)證各重復(fù)三次，共做六次。溫度驗(yàn)證系統(tǒng)

5個點(diǎn)六次試驗(yàn)表明溫度均在121℃，化學(xué)指示卡變黑；程度與對照色一致；培養(yǎng)基均未改變顏色，說明高壓蒸氣滅菌效果合格。